Сироватка крові — матеріал, що найчастіше використовується в КДЛ. Для отримання сироватки кров має повністю згорнутись. Повне зсідання крові у пацієнтів, які не приймають антикоагулянти, відбувається в середньому протягом 1 години. Подальше ущільнення згустку відбувається при центрифугуванні. Для отримання якісної проби важливо витримати повний час згортання крові. Якщо ж кров згорнулася не повністю, то фібрин, що залишився після центрифугування, може змінювати оптичну щільність проби, а також засмічувати зонди аналізаторів. Для прискорення процесу коагуляції використовуються активатори згортання – кремнезем та тромбін. У скляних пробірках функцію активатора згортання виконує безпосередньо сама скляна стінка пробірки, оскільки до складу скла входить кремній, який прискорює процес коагуляції. У пластикові пробірки додаються активатори згортання: кремнезем та/або тромбін. Внутрішні стінки пробірок зазвичай покриті силіконом для запобігання адгезії клітин крові до поверхні стінок.

Мікронізований кремнезем - активатор згортання, що діє на тромбоцитарну ланку та плазмовий гемостаз. Активатор згортання використовується у сироваткових пластикових пробірках з гелем та без гелю. Кремнезем - порошок, розпорошений на внутрішні стінки пробірки, що візуально визначається у вигляді каламутного напилення всередині пробірки. Частинки кремнезему нерозчинні. Вони наносяться на поверхню пробірки у вигляді спрею водного розчину з поверхнево-активною речовиною (ПАР). ПАР покращує дисперсію частинок кремнезему, а також сприяє зниженню адгезії клітин на стінки пробірки. Пробірки з активатором зсідання кремнеземом вимагають обов'язкового перемішування (5-6 разів). Перемішування зменшує час згортання і посилює стягування згустку та,отже, збільшує обсяг одержуваної сироватки. Перемішування також зменшує концентрацію ПАР та кремнезему в сироватці (вони залишаються усередині згустку).

Для отримання сироватки використовуються вакуумні пробірки без гелю (мають червоно/біле кодування кришок) та гелем (мають жовте кодування кришок).

1. Вакуумні пробірки для отримання сироватки без гелю

Вакуумні пробірки для отримання сироватки мають червоно/біле кодування кришок різняться і бувають двох видів - скляні та пластикові. Кремнезем додається тільки до пластикових пробірок, скляні взагалі не містять наповнювача. Після взяття проби крові в пластикові пробірки її слід перемішати шляхом перевертання 5-6 разів для кращого контакту з активатором згортання. Перш ніж центрифугувати пробірки із сироваткою, необхідно дочекатися повного згортання крові. Мінімальний час повного згортання у пробірках цього типу – 60 хвилин. Умови центрифугування: 1300 г. протягом 10 хвилин.

2. Вакуумні пробірки з гелем для отримання та відділення сироватки

Вакуумні пробірки з гелем виробляються тільки з пластику, і їх можна відрізнити жовтою кришкою. З метою кращого відокремлення згустку крові від сироватки до пробірки доданий гель — спеціальний матеріал, призначений для утворення стійкого бар'єру між клітинними компонентами крові та сироваткою під час центрифугування). Гель спеціально розташований у пробірці таким чином (під нахилом), щоб під час центрифугування полегшувався його механічний рух та відокремлення згустку крові від сироватки. Специфічна питома вага гелю підібрано таким чином (між щільністю формених елементів крові та щільністю сироватки), що при центрифугуванні гель «спливає» над еритроцитами і розташовується міжформеними елементами крові та сироваткою. Гель твердне, і утворюється бар'єр між форменими елементами крові та сироваткою. Стійкий бар'єр утворюється через 5 хвилин після закінчення центрифугування проби. У пробірку з гелем доданий кремнезем у кількості, що забезпечує повне згортання крові протягом 30 хв. Після взяття проби крові у вакуумні пробірки з гелем її слід перемішати шляхом перевертання 5-6 разів. Умови центрифугування: 1500-2000 г протягом 10 хв. пробірки з гелем не можна центрифугувати повторно, щоб уникнути гемолізу проби. При центрифугуванні вакутейнерів з гелем не можна використовувати центрифуги з кутовими роторами, оскільки частина еритроцитів може потрапити в сироватку.

Переваги вакуумних пробірок з гелем щодо підвищення ефективності виконання аналізів:

  • скорочується час проведення аналізу (немає необхідності чекати 1:00 для завершення утворення згустку);
  • «вихід» сироватки при центрифугуванні більше (особливо це у педіатрії);
  • центрифугувати треба лише один раз;
  • після центрифугування пробу можна спокійно транспортувати без відокремлення від формених елементів крові;
  • можливе проведення аналізу у первинній пробірці;
  • можна переливати сироватку в інші пробірки без застосування піпеток;
  • пробірки можна заморожувати -20°С.

Переваги вакуумних пробірок з гелем щодо підвищення стабільності аналітів та чистоти зразка:

  • знижується ймовірність гемолізу при центрифугуванні;
  • знижується ймовірність присутності латентного фібрину в сироватці;
  • збільшується термін зберігання зразка;
  • підвищується стабільність аналітів (ферментів, електролітів, гормонів та ін) з 2 годин до 3 і більше днів; наприклад,стабільність АСТ, ЛДГ та калію зберігається протягом 6 діб при температурі 4°C;
  • можливе використання сироватки для спеціальних аналізів, особливо для дослідження гормонів, таких як естрадіол та прогестерон;
  • можливе проведення лікарського моніторингу щодо цілого ряду фармакологічних препаратів;
  • відсутність на пробу чинників довкілля (мікроорганізми, окислення тощо.);
  • точніша відповідність отриманих in vitro результатів дослідження стану внутрішнього середовища організму пацієнта (стану in vivo).

В силу наведених переваг використання вакуумних пробірок з гелем призводить до значного зниження числа помилок на преаналітичному етапі, тому їх переважно використовувати при централізації лабораторних досліджень.

3. Вакуумні пробірки для отримання сироватки з тромбіном

Тромбін є природним активатором згортання та значно скорочує час утворення згустку до 3-5 хвилин. Тромбін використовується в пробірках з помаранчевою кришкою і може застосовуватись для проведення всіх досліджень сироватки, але найчастіше використовується для експрес-аналізів. У пробірках з тромбіном виходить очищена сироватка, ніж у звичайних пробірках. Виготовляються скляні пробірки, в яких міститься лише тромбін, та пластикові пробірки, в яких використовується комплексний наповнювач – тромбін із кремнеземом. Також проводяться пробірки з тромбіном та гелем, час згортання крові в яких 3-5 хвилин. Після заповнення пробірки з тромбіном кров'ю її слід обов'язково перемішати шляхом перевертання 5-6 разів. Повне зсідання крові відбувається за 5 хвилин. Умови центрифугування: пробірки без гелю 1300 g протягом 10 хвилин, пробірки з гелем 1300-1500 gпротягом 10 хв.

Пробірки з гелем не можна повторно центрифугувати. При використанні пробірок з тромбіном підвищується якість проби та знижується час, який витрачається на проведення тесту в лабораторії. Ці пробірки є ідеальним рішенням для пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі та одержують терапію гепарином.